Reins

Reins Introduction sur la préparation Je vais vous présenter mes lames de Rein. Il faut prélever sur des souris qui viennent d’être euthanasiées. Faire une fixation chimique pour conserver l’état initial, grâce à du Carnoy. Après le temps de fixation, on élimine les fixateurs, on fait des rinçages dans des bains d’alcool 100. Une déshydratation est nécessaire pour l’inclusion en paraffine car elle est hydrophobe. On fait donc 2 bains d’alcool 100 pendant 1 heure chacun. On va ensuite inclure pour imprégner totalement l’organe et parfaire sa rigidité indispensable pour couper l’organe. On fait donc 2 bains de butanol pur (pour enlever l’alcool), on rajoute de la paraffine dans le deuxième bain de butanol, puis on fait 2 bains de paraffine pure. On procède ensuite à l’inclusion réelle en bloc rigide, à l’aide de barres de Leuckart. On fait ensuite des coupes au microtome (5 µm d’épaisseur), après taille du bloc en forme pyramidale. On obtient des rubans de coupes, que l’on dépose sur une lame, sur laquelle on a déjà déposé de l’eau albumineuse (Albumine-glycérine, eau et hydroxybenzoate de méthyle). On rajoute quelques gouttes d’eau distillée pour défroisser. On place la lame sur platine chauffante pour sécher, puis dans l’étuve à 37°C pendant 24h. On doit ensuite réhydrater l’organe pour le colorer, car les colorants sont aqueux, et que la paraffine est hydrophobe. On doit donc déparaffiner à l’Histolémon. On utilise ensuite les batteries de Borels pour réhydrater. On fait ensuite le montage final, pour l’observation, avec le baume du Canada, qui a un indice de réfraction proche du verre (1.55), est amorphe, et ne cristallise pas avec le temps. Mais il est hydrophobe et non miscible à l’alcool. On doit donc déshydrater les échantillons, avec les batteries de Borels en sens inverse et de l’Histolémon. On dépose alors le baume sur la lamelle, qu’on retourne sur la lame, on laisse sécher 24h à 37°C. Présentation de l’organe Localisation : Organe pair ; Rétro-péritonéal ; 1 lobe chez la souris Rôle physiologique : Filtration du sang, formation de l’urine Présentation macroscopique : 2 parties (cortex, médulla), Hile (pyramides de Malpighi, bassinet au niveau du calice) ; unité structurale : le néphron Présentation microscopique Lames Rein complet Erythrosine – bleu de toluidine x40 Glomérule x600 TCP x600 Anse de Henlé x600 TCD x600 Rein complet au Trichrome x40 Glomérule x600 TCP x600 TCD x600 Rein complet au bleu de Toluidine – éosine x40 Coloration (Pourquoi ?) Erythrosine – bleu de toluidine : Coloration différentielle des cytoplasmes acides ou basiques, coloration de fond – Colorant basique qui reconnait les structures acides comme l’ADN, certaines mucines sont également colorées en pourpre-rouge, métachromasie. Noyaux en bleu, pratique pour TCP/TCD, belles lames. Trichrome en 1 temps : composition : Azorubine S (E 122) (noyaux en rouge/rose), acide phosphomolybdique, vert solide (vert lumière très pur) (prend sur les fibres de collagène et les structures riches en mucopolysaccharides), solution aqueuse saturée en jaune Naphtol (structures acidophiles), acide acétique (fixation des colorants). Ici, réel intérêt pour l’observation des BEB, glomérule. Bleu de Toluidine – éosine : Colorant basique qui reconnait les structures acides comme l’ADN. Certaines mucines sont également colorées en rouge-pourpre, c’est la métachromasie – colorant de fond. Ici, seul intérêt pour voir le calice. Structures (Ouverture physiologique) Voir néphron Critique de la coloration (Qualité, choix) Aurait dû faire un vert-lumière pour voir les BEB.